孙晓彤1, 赵丹1, 闫晓平3, 郭巍1,2, 徐大庆3, 李少雅1, 李景2
SUN Xiaotong1, ZHAO Dan1, YAN Xiaoping3, GUO Wei1,2, XU Daqing3, LI Shaoya1, LI Jing2
摘要: 利用RACE-PCR方法,扩增得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰基酶基因secda1。将secda1基因插入到载体pPIC9K多克隆位点,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,得到重组质粒pPIC9K-secda1。重组质粒经线性化后,电击转化缺陷性毕赤酵母GS115感受态细胞,构建含有目的基因的重组酵母菌株。经甲醇诱导表达,Western blot分析后表明secda1基因在毕赤酵母GS115中成功表达80 kDa蛋白。脱乙酰基酶活性测定结果显示重组蛋白酶活力为1.35 U/mL。利用 RT-PCR对该基因进行mRNA水平上的表达分析,结果表明secda1在幼虫取食期的头、表皮、中肠、马氏管、脂肪体及蛹期虫体均有表达;本研究利用毕赤酵母成功表达具有酶活力的重组SeCDA1蛋白,为进一步明确SeCDA1蛋白的生理功能提供条件,并为以SeCDA1蛋白为靶标更有效地防治甜菜夜蛾提供理论依据。
中图分类号: