枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化

枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化

王培培^1,2, 郭庆港², 李社增², 鹿秀云², 李宝庆², 张莉萍³, 马平², 董金皋¹

1. 河北农业大学植物保护学院, 保定 071000;2. 河北省农林科学院植物保护研究所/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心, 保定 071000;3. 河北省张家口市植物保护植物检疫站, 张家口 075000

收稿日期:2010-12-30 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-08-25 发布日期:2011-08-25
通讯作者: 马平, 博士, 研究员, 博导, E-mail: pingma88@126.com。

High-efficiency Electro-transformation of Bacillus subtilis Strain NCD-2

WANG Pei-pei^1,2, GUO Qing-gang², LI She-zeng², LU Xiu-yun², LI Bao-qing², ZHANG Li-ping³, MA Ping², DONG Jin-gao¹

1. College of Plant Protection, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000;2. Insititute of Plant Protection, Hebei Academyof Agriculture and Forestry Sciences, IPM centre of Hebei Province, Baoding 071000;3. Zhangjiakou Plant Protection and Plant Quarantine Station, Hebei province, Zhangjiakou 075000, China

Received:2010-12-30 Revised:1900-01-01 Online:2011-08-25 Published:2011-08-25

摘要/Abstract

摘要： 本研究对影响枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis NCD-2菌株遗传转化的因素进行摸索并对其转化条件进行优化, 建立了该菌株的高效电击转化体系。通过比较5个不同大小和携带不同来源复制子的质粒对其转化效率的影响, 发现质粒大小与NCD-2菌株的电击转化效率之间没有相关性; 而携带来源于Bacillus coagulans复制子的质粒pNW33N时, NCD-2菌株的电击转化效率最高, 达到3.53×10⁴cfu·μg^-1 DNA, 说明复制子来源是影响转化效率的一个重要因素。采用pNW33N质粒在不同电阻、电场强度及培养时间下的电击转化效率的研究结果表明, 该菌株转接到生长培养基后, 37℃、150r·min^-1培养3.5h, 在电阻值200Ω、电场强度14.0kV·cm^-1的条件下转化效率最高, 达到6.07×10⁴cfu·μg^-1 DNA。优化后的转化体系为顺利开展枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的分子操作奠定了基础。

Abstract: Transformation efficiency of Bacillus subtilis stain NCD-2 was compared when the transformation was performed by using 5 different plasmids with various sizes and replication origins. Results showed that the replication origin of plasmid had a significant effect on the transformation efficiency, but not the plasmid size. For example, plasmid pNW33N carried the replication from B. coagulans showed the highest transformation efficiency by 3.53×10⁴ cfu·μg^-1 DNA. Other parameters affecting the transformation efficiency, including electric resistances, electric field strengths and cell growth phases, were also optimized with plasmid pNW33N. The result revealed that the highest transformation efficiency of 6.07×10⁴ cfu·μg^-1 DNA in strain NCD-2 could be obtained under the optimized condition, the cells of strain NCD-2 electroporated at 14.0 kV·cm^-1 and 200 Ω after incubated at 150 r·min^-1 and 37 ℃ in growth medium for 3.5 h.

中图分类号:

S476.8
Q78

王培培1,2 , 郭庆港2 , 李社增2 , 鹿秀云2 , 李宝庆2 , 张莉萍3 , 马平2 , 董金皋1 . 枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化[J]. , DOI: .

WANG Pei-pei^1,2, GUO Qing-gang², LI She-zeng², LU Xiu-yun², LI Bao-qing², ZHANG Li-ping³, MA Ping², DONG Jin-gao¹. High-efficiency Electro-transformation of Bacillus subtilis Strain NCD-2[J]. , DOI: .

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