96孔板高通量选育嗜线虫致病杆菌高产帕克素菌株

96孔板高通量选育嗜线虫致病杆菌高产帕克素菌株

张易¹, 李佳¹, 钟娟², 邱德文¹, 杨秀芬¹

1. 中国农业科学院植物保护研究所/农业部作物有害生物综合治理重点实验室, 北京 100081;2. 中国科学院成都生物研究所成都 610041

收稿日期:2012-09-12 修回日期:1900-01-01 出版日期:2013-08-08 发布日期:2013-08-08
通讯作者: 杨秀芬,研究员,E-mail：yangxiufen@caas.net.cn。

Screening of High Yield Pekingmycin-producing Strains of Xenorhabdus nematophila var. pekinense by Cultivation in 96-well Microtiter Plates

ZHANG Yi¹, LI Jia¹, ZHONG Juan², QIU Dewen¹, YANG Xiufen¹

1. Key Laboratory of Pest Management in Crops, Ministry of Agriculture/Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100081;2. Chengdu Institute of Biology, Chinese Academy of Sciences, Chengdu 610041

Received:2012-09-12 Revised:1900-01-01 Online:2013-08-08 Published:2013-08-08

摘要/Abstract

摘要： 帕克素(pekingmycin)是嗜线虫致病杆菌北京变种Xenorhabdus nematophilus var. pekinense CB6菌株代谢产生的广谱抗生素。研究证明帕克素对马铃薯晚疫病和辣椒疫病均具有较好的田间控制效果。为了进一步提高帕克素产量,为实现产业化奠定基础,本文首次用96孔板高通量筛选技术进行了帕克素高产菌株的筛选。将原始菌株CB6用紫外、微波和亚硝基胍诱变后在96孔板固体培养基上培养72 h,35%甲醇浸提24 h,根据浸提液OD₃₁₂紫外吸收值和抑菌圈直径筛选出10株活性较高的正突变株。但由于存在遗传不稳定现象,故对其中一株优良突变株90#(菌株编号为90)进行了二次累加诱变,经初筛和复筛,得到4株比出发菌株抑菌圈显著增加的突变株,较出发菌株抑菌圈直径提高了6.39%～11.94%。对其中的2株突变株进行了遗传稳定性测定,结果表明,连续培养6代后,突变株抑菌圈直径无显著变化,菌株特性能稳定遗传。

Abstract: Pekingmycinis a broad spectrum antibiotic produced by X.nematophila var. pekinense CB6, a bacterial strain carried in intestine ofentomopathogenicnematodeSteinernema carpocapsae. Previous study showed pekingmycin was suppresive against Phytophthora blight of potato and pepper in fields. In order to improve the Pekingmycin productivity, we treated the parental strain CB6 with ultraviolet (UV), microwave (MW) and nitrosoguanidine (NTG) and cultivated in 96 well microplates for mutants screening. Pekingmycin component was extracted with 35% methanol for 24 h. High activity strains were determined based on UV absorption at 312 wavelength and antibiotic assay against B.subtilis on solid plate. Four mutant strains with high antibiotic activity were screened out and their inhibitory zone was increased by 6.39%－11.94% in comparison with the original strain CB6. Bioassay showed no significant change in inhibitory zone after 6 generations, indicating the mutant strains are genetically stable in highly antibiotic activity.

中图分类号:

S476.8

张易1 , 李佳1 , 钟娟2 , 邱德文1 , 杨秀芬1 . 96孔板高通量选育嗜线虫致病杆菌高产帕克素菌株[J]. , DOI: .

ZHANG Yi¹, LI Jia¹, ZHONG Juan², QIU Dewen¹, YANG Xiufen¹. Screening of High Yield Pekingmycin-producing Strains of Xenorhabdus nematophila var. pekinense by Cultivation in 96-well Microtiter Plates[J]. , DOI: .

[1]	张亮, 吕翠, 段彩琛, 王运生, 黄军, 杜杰, 黎定军, 刘清术, 陈武. 转录调控因子AbrB对生防短短芽胞杆菌X23中抗生素edeines生物合成的影响[J]. 中国生物防治学报, 2020, 36(4): 564-574.
[2]	黄蓉, 胡建坤, 黄瑞荣. 酵母挥发性物质环辛四烯抑制灰霉菌的研究[J]. 中国生物防治学报, 2017, 33(2/3): 266-272.
[3]	高毓晗, 李世东, 郭荣君. sfp基因转化增强了Bacillus subtilis 168的定殖能力和对黄瓜茎内枯萎病菌的抑制作用[J]. 中国生物防治学报, 2016, 32(1): 76-85.
[4]	贾珂1 , 李世东1 , 刘桂君2 , 郭荣君1 . 枯草芽孢杆菌B006产surfactin突变株特性及其对黄瓜枯萎病的抑制能力[J]. , 2013, 29(4): 538-546.
[5]	王爱军1,2 , 柴兆祥1 , 李金花1,2 , 郭庆刚3 , 王蒂2 . 马铃薯干腐病菌和黑痣病菌拮抗芽胞杆菌的筛选及鉴定[J]. , 2013, 29(4): 586-594.
[6]	张玉芹1,2 , 高加明3 , 张成省1 , 孔凡玉1 , 王静1 , 冯超1 . 枯草芽孢杆菌菌株Tpb55的安全性毒理学研究[J]. , 2013, 29(4): 601-606.
[7]	黄蓉1,2 , 杨龙1 , 张静1 , 李国庆1 . 出芽短梗霉菌株YW1防治储藏期草莓灰霉病的研究[J]. , 2013, 29(4): 531-537.
[8]	张建萍, 朱凯, 余柳青. 产蛇孢菌素A禾长蠕孢REMI突变体的制备及其筛选[J]. , 2013, 29(3): 424-430.
[9]	杨琦瑶1,2 , 索雅丽1 , 郭荣君1 , 李世东1 , 许修宏2 . 枯草芽孢杆菌B006对黄瓜枯萎病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用及其抗菌组分分析[J]. , 2012, 28(2): 235-242.
[10]	喻国辉1 , 周林1,2 , 程萍1,2 , 黎永坚1 , 杨紫红1 . 枯草芽孢杆菌TR21对香蕉抗病相关基因表达的诱导作用[J]. , 2012, 28(1): 152-156.
[11]	张荣胜, 刘永锋, 陈志谊. 水稻细菌性条斑病菌拮抗细菌的筛选、评价与应用研究[J]. , 2011, 27(4): 510-514 .
[12]	田兆丰, 刘伟成, 刘霆, 董丹. 小链霉菌Yn168发酵产物抗植物病毒活性的研究[J]. , 2011, 27(4): 569-572 .
[13]	王培培1,2 , 郭庆港2 , 李社增2 , 鹿秀云2 , 李宝庆2 , 张莉萍3 , 马平2 , 董金皋1 . 枯草芽孢杆菌NCD-2菌株的高效电击转化[J]. , 2011, 27(3): 368-372.
[14]	于冰, 申屠旭萍, 俞晓平. 丰加霉素对黄瓜立枯丝核菌的拮抗作用[J]. , 2011, 27(3): 373-377.
[15]	钟增明, 李世东, 高会兰, 孙漫红. 链孢粘帚霉寄生核盘菌菌核相关基因的EST生物信息学分析[J]. , 2011, 27(2): 207-213.