哈茨木霉T2-16的GFP标记及其生防特性

doi:10.16409/j.cnki.2095-039x.2019.02.007

中国生物防治学报 ›› 2019, Vol. 35 ›› Issue (2): 247-254.DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2019.02.007

哈茨木霉T2-16的GFP标记及其生防特性

田程¹, 张屹², 肖姬玲², 朱菲莹², 唐炎英³, 魏林³, 梁志怀^1,2

1. 湖南大学研究生院隆平分院, 长沙 410125;
2. 湖南省农业生物技术研究所, 长沙 410125;
3. 湖南省植物保护研究所, 长沙 410125

收稿日期:2018-08-13 出版日期:2019-04-08 发布日期:2019-04-12
通讯作者: 梁志怀,研究员,E-mail:liangzhihuainky@163.com
作者简介:田程,女,硕士研究生,E-mail:374820322@qq.com
基金资助:
湖南农业科技创新项目（2017JC77）；湖南省重点研发计划（2017NK2371）；国家重点研发计划（2018YFD0201300）

GFP -labeled Transformation of Trichoderma harzianum T2-16 and Its Biocontrol Characteristics

TIAN Cheng¹, ZHANG Yi², XIAO Jiling², ZHU Feiying², TANG Yanying³, WEI Lin³, LIANG Zhihuai^1,2

1. Graduate School of Hunan University, Longping Branch, Changsha 410125, China;
2. Hunan Agricultural Biotechnology Research Institute, Changsha 410125, China;
3. Institute of Plant Protection, Hunan Province, Changsha 410125, China

Received:2018-08-13 Online:2019-04-08 Published:2019-04-12

摘要/Abstract

摘要： 优化高效拮抗生防菌哈茨木霉T2-16的转化条件，筛选出与野生型菌株具有相似生防特性的阳性转化子，为生防木霉菌T2-16的定殖动态、分布规律等研究打下基础。通过PCR和分子克隆技术构建具有G418抗性基因的绿色荧光（GFP）表达载体pKN-sGFP，利用PEG-CaCl₂介导的原生质体转化法，获得强荧光表达的哈茨木霉T2-16转化子，并将其与野生型菌株的生物特性进行比较，筛选出与野生型菌株具有相似生防特性的阳性转化子。试验结果显示，哈茨木霉T2-16在20℃培养条件下对1000 μg/mL G418敏感，在上述优化条件下，转化获得稳定遗传的阳性转化子TG2-10；进一步比较其与野生型菌株的生物特性发现，两者之间无明显差异，可用于下一步哈茨木霉T2-16生防机理的研究。

关键词: 哈茨木霉, 绿色荧光蛋白, 载体构建, 生防效果

Abstract: Optimizing the transformation conditions of highly antagonistic Trichoderma harzianum T2-16 and screening the positive transformants with similar biocontrol characteristics to wild-type strain will lay a foundation for determination of colonization dynamics and distribution of T. harzianum T2-16. In this study, the green fluorescence protein (GFP) expression vector with G418 resistance gene, named pKN-sGFP, was constructed by PCR and molecular cloning technology. T. harzianum T2-16 transformant with high fluorescent expression level was obtained by PEG-CaCl₂-mediated protoplast transformation, and a positive transformant with similar biocontrol properties to wild-type strain was screened out. T. harzianum T2-16 strain was sensitive to 1000 μg/mL G418 at 20℃. Under the above optimized conditions, the stable genetic positive transformant TG2-10 was obtained and compared with the wild-type strain. There was no significant difference in biocontrol characteristics between the two strains. Thus, the transformant TG2-10 could be used to further study the biocontrol mechanism of T. harzianum T2-16 in the future.

Key words: Trichoderma harzianum, green fluorescent protein, vector construction, biological control

中图分类号:

S476

田程, 张屹, 肖姬玲, 朱菲莹, 唐炎英, 魏林, 梁志怀. 哈茨木霉T2-16的GFP标记及其生防特性[J]. 中国生物防治学报, 2019, 35(2): 247-254.

TIAN Cheng, ZHANG Yi, XIAO Jiling, ZHU Feiying, TANG Yanying, WEI Lin, LIANG Zhihuai. GFP -labeled Transformation of Trichoderma harzianum T2-16 and Its Biocontrol Characteristics[J]. journal1, 2019, 35(2): 247-254.

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GFP -labeled Transformation of Trichoderma harzianum T2-16 and Its Biocontrol Characteristics

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