利用原生质体融合技术选育高效拮抗番茄猝倒病的木霉工程菌株

doi:10.16409/j.cnki.2095-039x.2017.01.014

中国生物防治学报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (1): 94-102.DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2017.01.014

利用原生质体融合技术选育高效拮抗番茄猝倒病的木霉工程菌株

陈凯, 李纪顺, 李玲, 魏艳丽, 王贻莲, 扈进冬, 赵忠娟, 杨合同

山东省科学院生态研究所/山东省应用微生物重点实验室, 济南 250014

收稿日期:2016-08-02 出版日期:2017-02-08 发布日期:2017-01-24
通讯作者: ,杨合同,研究员,E-mail:yanght@sdas.org
作者简介:陈凯,工程师,E-mail:chenkai19960917@163.com;李纪顺,高级工程师,E-mail:yewu2@sdas.org
基金资助:
山东省重点研发计划（2015GNC113003）；科技基础性工作专项（2014FY120900）；公益性行业（农业）科研专项（201303025）；山东省农业重大应用技术创新项目

Screening Efficient Trichoderma Engineering Strain against Tomato Damping-off by Protoplast Fusion

CHEN Kai, LI Jishun, LI Ling, WEI Yanli, WANG Yilian, HU Jindong, ZHAO Zhongjuan, YANG Hetong

Shandong Provincial Key Laboratory of Applied Microbiology/Ecology Institute of Shandong Academy of Sciences, Jinan 250014, China

Received:2016-08-02 Online:2017-02-08 Published:2017-01-24

摘要/Abstract

摘要： 通过热-紫外灭活原生质体融合，筛选高效拮抗番茄猝倒病的木霉工程菌株。采用PTC助融将灭活的原生质体进行融合，得到31株融合子，融合率达10.5%。灰色关联度分析表明，初筛的9株融合子的综合生防性状均高于亲本菌株，其中融合子Tpf-2效果最好。生物学性状测定结果与随机扩增多态性DNA（RAPD）结果表明，不同融合子存在遗传多态性，同一融合子具有遗传稳定性，融合子的聚类分析与其形态学分类正相关。温室试验结果表明，融合子Tpf-2对由瓜果腐霉和终极腐霉引起的番茄猝倒病防治效果分别达到86.3%和85.7%，与亲本菌株差异显著。本研究得到的融合子Tpf-2具有遗传稳定性，综合生防性状优良，是防治番茄猝倒病的理想菌株。

关键词: 木霉, 原生质体融合, 灰色关联度, RAPD, 番茄猝倒病

Abstract: By thermal and ultraviolet inactivated protoplast fusion, efficient Trichoderma fusant against tomato damping-off were screened. The protoplasts of T. harzianum TW21990 and Trichoderma sp. TW21990-1 were inactivated by thermal and ultraviolet treatment, respectively, and protoplast fusion with PTC (as fluxing agent) was conducted on inactivated protoplast. Thirty-one fusants were obtained and the fusion rate reached to 10.5%. Based on morphological characteristics, all the fusants could be divided into three types, some fusants similar to parents TW21990 or TW21990-1, while other fusants showing an intermediate morphological phenotype. Gray correlative degree analysis showed that biocontrol characters of nine Trichoderma fusants were superior to the parents, and fusant Tpf-2 was the best one. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis and biological character detection showed that different fusants had different relationship with parents, and there were diversity among them. The same fusant had inheritable stability after ten generations. Morphological identification was consistent with UPGMA analysis of RAPD. The control efficiencies of fusant Tpf-2 were 86.3% and 85.7% against tomato damping-off caused by Pythium aphanidermatum and P. ultimum, respectively, significantly higher than those of the parents (P<0.01). Due to its inheritable stability and superior biocontrol characters, fusant Tpf-2 is a promising candidate for the control of tomato damping-off.

Key words: Trichoderma spp., protoplast fusion, grey relational degree, RAPD, tomato damping-off

中图分类号:

S476
Q939.5

陈凯, 李纪顺, 李玲, 魏艳丽, 王贻莲, 扈进冬, 赵忠娟, 杨合同. 利用原生质体融合技术选育高效拮抗番茄猝倒病的木霉工程菌株[J]. 中国生物防治学报, 2017, 33(1): 94-102.

CHEN Kai, LI Jishun, LI Ling, WEI Yanli, WANG Yilian, HU Jindong, ZHAO Zhongjuan, YANG Hetong. Screening Efficient Trichoderma Engineering Strain against Tomato Damping-off by Protoplast Fusion[J]. journal1, 2017, 33(1): 94-102.

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